Cell viability 측정 - MTT assay 원리 및 Protocol

MTT assay란

세포 생존 또는 세포 증식을 측정하기 위해 널리 사용되는 생물학적 분석입니다. 이 방법은 주로 세포 독성, 약효, 세포 증식 등을 연구하는 데 사용됩니다.

 

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MTT asay 원리

MTT assay의 반응 원리는  노란색 수용성 테트라졸륨염 (3-[4,5-dimethylthiazol-2-l]-2,5- diphenyltetrazolium bromide; thiazolyl blue)이 보라색 formazan (포르마잔)으로 환원으로 전환되는 것을 기반으로 하는 실험이며, 이처럼 색이 변하는 원인으로는  세포내 미토콘드리아에서 NAD(P)H 의존성 산화환원효소에 의해 formazan (포르마잔)으로 환원되어 보라색으로 전환됩니다.

MTT가 환원되어 포르마잔이 형성되면 DMSO 용액으로 세포막을 용해시켜 유기용매에 포르마잔을 녹여냅니다.

그런 흡광도 측정기를 사용하여 포르마잔 용액을 570nm wavelength로 측정하여 세포의 생존 또는 증식 정도를 확인합니다. 이 때 포르마잔의 양은 세포의 생존이나 증식 정도에 정비례합니다.

 

MTT assay 원리

출처: https://www.aatbio.com/

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MTT 실험 Protocol

 

•  MTT 용액 제조

MTT powder를 50ml Conical tube에 2mg/ml의 농도로 PBS에 용해하여 제조하며 파우더를 녹인 후 Synringe filter를 사용하여 한번 걸러줍니다.  

 

장기간 보관할 경우 -20℃에 저장하시면 되고, 실험에 사용할 경우 4℃보관하시면서 사용하시면 됩니다.

 

 

• 세포 배양

실험 목적에 따라서 원하는 약물을 세포에 처리하여 반응시킵니다.

 

 

• MTT 처리

1. 96well plate를 기준으로 200ul의 용량의 미디어에 10%의 양으로 MTT solution을 처리합니다.

2. MTT solution 처리 후 1시간~1시간반 정도 37 ℃ 인큐베이터 내에서 차광하여 반응합니다.

3. 반응이 끝나면 미디어 제거 후 200ul DMSO 용매를 추가하여 shaker 위해서 10~20min간 반응합니다.

4. 흡광도 리더기 570nm에서 활성도를 측정합니다.

 

그 외 참고사,  6well에서 실험하실 경우에도 위와 동일하게 미디어 양의 10%의 양으로 첨가하여 반응하시면 됩니다. 

DMSO의 경우 2ml로 세포를 용해하시면 Control 기준에 80%의 cell cofluency에서 OD값은 1 근처로 측정이 됩니다.

 

• MTT 정량

MTT assay 정량하는 방법은 Control 대비 백분율(%)로 계산하시면 됩니다.

 

 

결론적으로,
MTT assay 실험은 상대적으로 빠르고 간단하며 많은 수의 샘플을 동시에 처리할 수 있습니다.

또한, 측정 결과를 정량화하여 세포 생존율이나 세포 증식율을 계산할 수 있어 다양한 생물학적 연구에 유용하게 활용됩니다.